资源类型：
收录情况：
◇ 统计源期刊
◇ 北大核心
◇ CSCD-E
文章类型：
单位：
[1] 华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科
华中科技大学同济医学院附属同济医院
妇产科学系
[2] 首都医科大学附属北京佑安医院妇产科
[3] 华中科技大学同济医学院附属襄樊中心医院妇产科
出处：
ISSN：
关键词：
卵巢癌
shRNA
GSK3β
摘要：
目的构建三位点干扰GSK3β基因的高效shRNA表达质粒载体。方法用DNA重组技术将针对人GSK3β基因不同部位所设计的3对shRNA序列克隆到高效RNAi真核表达质粒载体pshRNA-U3中,构建shRNA表达载体pshRNA-U3/GSK3β。脂质体介导转染人卵巢癌细胞株OV2008,流式细胞仪检测转染效率。运用实时定量PCR和Westernblot分别检测RNA水平和蛋白水平GSK3β的干扰效果。运用流式细胞仪检测紫杉醇诱导的凋亡率。结果经测序证实成功构建携带3个GSK3βshRNA的表达载体pshRNA-U3/GSK3β。RT-PCR和Westernblotting均证实重组质粒pshRNA-U3/GSK3β转染OV2008后可明显降低细胞内GSK3βmRNA丰度及GSK3β蛋白表达。FACS显示,干扰GSK3β可抵抗紫杉醇诱导的凋亡。结论成功构建了针对GSK3β的三位点shRNA表达载体pshRNA-U3/GSK3β,并进行了初步的功能效应验证,为进一步研究GSK3β蛋白分子的生物学功能及应用奠定了基础。
基金：
国家自然科学基金(30571950)%海外青年学者合作研究基金(30528012)%国家重点基础研究发展规划(973计划)(2002CB513107)
第一作者：
第一作者单位：
[1] 华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科
[2] 首都医科大学附属北京佑安医院妇产科
推荐引用方式(GB/T 7714)：
宋晓红,翁丹卉,邢辉,等.三位点GSK3β shRNA真核表达质粒的构建及鉴定[J].肿瘤防治研究.2010,37(05):495-499.
