摘要:
目的探讨类果蝇分节因子4(Krppel-like factor 4,KLF4)反义基因对原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中血管性血友病因子(vWF)、纤溶酶原抑制物-1(PAI-1)表达的影响,明确KLF4在内皮细胞调节血栓形成中的作用。方法胰蛋白酶消化法分离和培养原代HUVEC,采用同源重组方法构建携带反义KLF4基因腺病毒,实时定量(Real-time)PCR、Western blot、激光共聚焦显微镜法检测转染KLF4反义基因后内皮细胞KLF4、PAI-1、vWF mRNA和蛋白的表达。结果成功构建出携带反义KLF4基因片段的重组腺病毒(Ad-反义KLF4),以感染复数值200的重组腺病毒感染HUVEC,KLF4mRNA相对表达水平由0.59±0.01下降至0.44±0.06,同时HUVEC中vWF mRNA相对表达水平升至1.17±0.05,与感染携带绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-GFP)组(1.04±0.03)相比,差异均具有统计学意义(P(0.05)。而HUVEC中PAI-1 mRNA相对表达水平增加至0.73±0.01,与感染Ad-GFP组(0.67±0.04)相比,差异无统计学意义(P)0.05)。与感染Ad-GFP组相比,感染Ad-反义KLF4的HUVEC中vWF、PAI-1蛋白表达水平明显增加。结论 KLF4反义基因可下调KLF4表达,促进内皮细胞中vWF、PAI-1的表达。KLF4可能参与内皮细胞抗栓作用的转录调节。