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重组腺病毒介导自杀基因HSV1-tk转染内皮祖细胞的实验研究

Experimental Study on Recombinant Adenovirus Vector-mediated Herpes Simplex Virus Type 1 Thymidine Kinase (HSV1-tk) Gene Transfecting to Endothelial Progenitor Cells

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收录情况: ◇ 统计源期刊

单位: [1]华中科技大学同济医学院附属同济医院
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关键词: 肿瘤血管生成 内皮祖细胞 基因治疗 单纯疱疹病毒胸腺激酶 腺病毒 载体

摘要:
[目的]构建含有自杀基因单纯疱疹病毒胸腺激酶基因(HSV1-tk)的重组腺病毒载体,并感染大鼠骨髓来源的内皮祖细胞(EPCs),以期用于抗肿瘤血管生成的基因治疗及核素报告基因显像。[方法]从大鼠骨髓中分离、培养EPCs,利用流式细胞术进行鉴定。构建重组腺病毒载体Ad5-HSV1-tk-EGFP,并感染EPCs,以腺病毒Ad5-EGFP为对照。利用RT-PCR法、Westernblot免疫印迹法检测HSV1-tk的表达,利用MTT法检测更昔洛韦(GCV)对病毒感染后EPCs的杀伤作用。[结果]流式细胞术结果显示从大鼠骨髓中分离出的EPCs阳性表达CD34(80.09%)和CD133(81.75%),RT-PCR及Westernblot免疫印迹结果显示HSV1-tk基因在转录及蛋白水平可以正确表达,MTT结果显示HSV-tk/GCV自杀基因系统对EPCs细胞具有明显的杀伤作用。[结论]重组腺病毒Ad5-HSV1-tk-EGFP感染EPCs后可以在细胞中成功表达,并且感染后自杀基因具有生物学活性,从而为利用EPCs作为载体进行肿瘤靶向基因治疗、报告基因显像提供实验依据。

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第一作者单位: [1]华中科技大学同济医学院附属同济医院
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