摘要:
目的:构建转录因子c-Ets-2的短发夹状双链RNA(shRNA)干扰质粒,验证其对转录因子c-Ets-2表达的干扰效果,并研究转录因子c-Ets-2对人凝血酶原酶(hfgl2)基因表达及细胞促凝活性的影响。方法:采用基因克隆方法构建c-Ets-2 shRNA干扰质粒,并使用酶切鉴定方法和测序进行证实。使用实时荧光定量逆转录PCR(qRTPCR)和Western blot方法对干扰效果进行验证。并进一步采用该质粒与HBV病毒蛋白表达质粒共转染单核细胞系THP-1,研究c-Ets-2 shRNA干扰质粒对hfgl2基因转录表达的影响和对细胞促凝活性的作用。结果:c-Ets-2 shRNA干扰质粒构建成功,可下调转录因子c-Ets-2 mRNA和蛋白水平的表达。当与HBx病毒蛋白表达质粒共转染时,该干扰质粒可抑制hfgl2基因的转录,降低细胞的促凝活性。结论:转录因子c-Ets-2与凝血级联途径有关,参与了重型肝炎和肝细胞癌等疾病的发生发展。