目的 对新近建立的乙肝研究动物模型喜马拉雅旱獭3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)的部分cDNA序列进行了克隆和序列分析,为该模型在HBV感染研究中的应用奠定基础.方法 根据Genbank的人GAPDH cDNA的序列设计特异性引物,以提取的旱獭脾组织总RNA为模板,RT-PCR扩增旱獭GAPDHcDNA序列.纯化的PCR产物连接至T载体(pMD 18-T),然后构建重组质粒pMD18-T-mhGAPDH.对重组质粒进行PCR初筛、酶切鉴定,将阳性克隆测序.对序列进行同源性以及种系进化分析.结果 扩增的旱獭GAPDH序列为535 bp,编码序列为533 bp (nt3-535),编码177个氨基酸.获得的序列和其它类哺乳动物GAPDH的同源性均在88％以上,其中与土拨鼠GAPDH的同源性最高(99.62％),氨基酸序列同源性高达100％.构建种系进化树,分析结果提示喜马拉雅旱獭GAPDH与土拨鼠GAPDH的亲缘关系最接近.结论 成功的克隆了喜马拉雅旱獭GAPDH的部分序列.序列分析结果提示喜马拉雅旱獭GAPDH与土拨鼠GAPDH的亲缘关系最近,同源性最高.
基金：
国家传染病科技重大专项课题(2008ZX10002011,2012ZX10004503)%国家国际科技合作项目(No.2011DFA31030) This work was supported by grants from the National Major Science and Technology Special Project for Infectious Diseases of China(2008ZX10002011,2012ZX10004503)%International Science & Technology Cooperation Program of China(2011DFA31030)
