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◇ 统计源期刊
◇ 北大核心
文章类型：
单位：
[1]常州大学制药与生命科学学院,常州,213164
[2]常州英赞美科生物科技有限公司,常州,213022
[3]华中科技大学同济医学院附属同济医院普外科,武汉,430030
华中科技大学同济医学院附属同济医院
出处：
ISSN：
关键词：
同型半胱氨酸α
γ-裂解酶
表达纯化
表征
摘要：
目的 研究以包涵体形式表达的重组同型半胱氨酸α,γ-裂解酶的表达、纯化,对其活性进行检测并对其酶学性质进行表征.方法 将同型半胱氨酸α,γ-裂解酶的重组表达载体pET-15 b/rHCYase转化大肠埃希菌BL21中,进行优化大量表达.使用Ni2亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,再通过His-Trap脱盐柱脱盐,采用MBTH法检测目的蛋白活性,并对该酶进行了表征.结果 重组蛋白在大肠埃希菌中可以高效表达,产量为204 mg·L-1,比活约206 U·mg-1.相对分子质量为45 200.重组酶的最适反应温度为35℃,酶活性稳定的温度范围为20～35℃.重组酶的最适反应pH为7.5,4℃下在pH7.5的缓冲溶液中保温5h酶稳定性最高.结论 成功克隆和表达了rHCYase蛋白,并得到高产高酶活的可溶性蛋白,对同型半胱氨酸检测试剂的开发有一定的潜在应用价值.
第一作者：
第一作者单位：
[1]常州大学制药与生命科学学院,常州,213164
推荐引用方式(GB/T 7714)：
王利群,孙培培,曹利民,等.重组同型半胱氨酸α,γ-裂解酶的表达纯化及表征[J].医药导报.2015,34(z1):4-7.
