目的:比较宫腔刷和宫颈刷两种采样方法进行DNA甲基化检测（CDO1/AJAP1/GALR1）在子宫内膜癌辅助诊断中的效能，为进一步临床应用提供参考。方法:纳入2023年7月13日至2023年10月26日在华中科技大学同济医学院附属同济医院门诊就诊、因疑似子宫内膜病变拟行子宫内膜活检的患者，活检前均先后采用宫颈刷和宫腔刷采样进行DNA甲基化检测。以子宫内膜活检病理结果为诊断金标准。结果:共纳入499例患者，其中正常对照组222例，病例组277例（子宫内膜不典型增生37例，子宫内膜癌240例）。宫腔刷采样组中，CDO1/AJAP1/GALR1三靶点模式下灵敏度[96.03%（93.03%～97.77%）]和AUC[96.81%（95.09%～98.53%）]最高。宫颈刷采样组中，不论是单靶点还是三靶点模式下，灵敏度均在59.21%～75.45%之间，明显低于宫腔刷的单靶点和三靶点模式；宫腔刷采样组的特异性更高，三靶点模式下，特异性为91.89%（87.55%～94.81%）,高于宫颈刷组[76.58%（70.58%～81.67%）]。当CDO1/AJAP1/GALR1三靶点联合检测时，无论在对照组还是病例组中，宫腔刷采样组的检测性能均优于宫颈刷，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:使用宫腔刷采样进行CDO1/AJAP1/GALR1三靶点DNA甲基化检测子宫内膜癌的诊断效能较宫颈刷采样更高，适宜临床推广应用。